Методы микробиологической диагностики вирусных инфекций

В вирусологии методы лабораторной диа­гностики вирусных инфекций имеют свою специфику, учитывая особенности биологии вирусов. В вирусологии используются три ме­тода лабораторной диагностики:

• вирусоскопическии,

• вирусологический,

• серологический.

Вирусоскопический метод заключается в об­наружении вируса в исследуемом материале под микроскопом. Чаще всего используют электронный микроскоп, реже — люминес­центный. Световая микроскопия из-за нич­тожно малых размеров вирусов практически не применяется. И лишь для обнаружения крупных вирусов, применяя методы «свер­хокраски», можно использовать световой микроскоп. Кроме того, с помощью свето­вого микроскопа можно выявить внутрик­леточные включения, которые образуются в пораженных клетках при некоторых инфек­циях.

Вирусологический метод заключается в заражении исследуемым материалом чувс­твительной биологической модели (лабора­торные животные, куриные эмбрионы или культуры клеток), индикации вируса и его последующей идентификации. При зара­жении лабораторных животных индикация вирусов производится, как правило, по кли­нической картине болезни, патолого-ана-гомическим изменениям ориентировочно и окончательно, например, с помощью реак­ции гемагглютинации. Эта же реакция поз­воляет выявить вирусы в курином эмбрионе, видимых изменений при вскрытии которого, как правило, не наблюдается. В культуре кле-

ток наличие вируса определяют по цитопати-ческому действию (в том числе образованию внутриклеточных включений), гемадсорб-ции, феномену бляшкообразования, реакции гемагглютинации, отсутствию изменения окраски индикатора. Идентификация вируса осуществляется с помощью серологических реакций (РПГА, РТГА, РН, РСК, ИФА и др.). Вирусологический метод позволяет точно определить природу возбудителя, но он тре­бует достаточного много времени (5—7 дней и более), значительных материальных затрат и небезопасен.

Особенностью серологического метода в вирусо­логии является исследование парных сывороток. Первую сыворотку берут у больного в острый период в начале болезни, хранят при темпера­туре +4... +8 °С, а вторую сыворотку берут через 10—14 дней. Сыворотки исследуют одномомент­но. О болезни свидетельствует сероконверсия, т. е. нарастание титра антител во второй сыворотке по отношению к первой. Диагностической является сероконверсия в 4 раза и выше. Так как многие вирусные болезни протекают остро, этот вариант серологического метода обычно применяют для ретроспективной диагностики.

Ведущим методом лабораторной диагнос­тики вирусных инфекций является вирусоло­гический.

Ускоренная и экспресс-диагностика вирус­ных болезней производятся так же, как при бактериальных инфекциях.

15.7. Особенности микробиологической
диагностики микозов

Для диагностики грибковых инфекций обычно используют микологический метод. Он заключается в посеве патологического ма­териала на специальные питательные сре­ды, выделении чистой культуры возбудителя и ее идентификации по морфологическим, культуральным и биохимическим свойствам. Особенностью метода является его продолжи­тельность — несколько недель из-за медлен­ного роста грибов. Обнаружение антител при серологическом исследовании возможно со 2—4-й недели болезни. При некоторых забо­леваниях выявляют специфические антигены в исследуемом материале. Аллергологический метод используют редко. Довольно часто при микозах используют гистологический метод, заключающийся в обнаружении элементов гриба (споры, конидиальные головки и т. п.) в органах и тканях, пораженных грибами. С этой целью готовят гистологические тонкие или ультратонкие срезы тканей, окрашивают их специальными гистологическими и гис­тохимическими методами и исследуют с при­менением световой, а если необходимо, то и электронной микроскопии.

15.8. Особенности микробиологической
диагностикипротозойных инфекций

Микроскопическое исследование патоло­гического материала заключается в приго­товлении как нативных препаратов («толстая капля»), так и мазков, окрашенных по методу Романовского—Гимзы, и является основным методом диагностики заболеваний, вызван­ных простейшими. В некоторых случаях при­меняют серологический и аллергологический методы диагностики.

15.9. Принципы иммунологической
диагностики болезней человека

Иммунологическая диагностика болезней человека основана на определении антиге­нов или антител в реакции антиген-антитело. Специфичность и чувствительность иммуно­логических реакций настолько высоки, что эти реакции легли в основу иммунометрии.

Так, например, методы иммунодиффузии, иммуноферментного и радиоиммунного ме­тодов стали стандартными методами коли­чественного определения белков, гормонов и других биологически активных веществ.

Иммунодиагностика — раздел иммуноло­гии, изучающий и разрабатывающий методы диагностики инфекционных и неинфекцион­ных болезней, связанных с функцией иммун­ной системы.

Многие инфекционные заболевания в на­стоящее время претерпели существенные.из­менения, что выражается в увеличении удель­ного веса легких, стертых и бессимптомных форм, росте аллергического компонента, высокой частоте микст-инфекций. Это за­трудняет традиционную диагностику заболе­ваний, поэтому значимость иммунодиагнос­тики, направленной на выявление антигенов возбудителя или специфических иммунных сдвигов в организме больного, возрастает.

Под иммунореактивностью (иммунный статус, иммунный профиль) понимают спо­собность иммунной системы к иммунному ответу в данный момент времени. Ее харак­теризуют не только концентрация иммуног­лобулинов, число лимфоцитов и лейкоцитов, соотношение Т- и В-клеток, но и функцио­нальные показатели, в частности способность иммунокомпетентных клеток отвечать на сти­муляцию.

Оценивая иммунный статус, следует иметь в виду большую вариабельность иммунологических показа­телей даже в норме. Следует отметить, что иммуно­логические параметры подвержены колебаниям в за­висимости от биоритма. Эти колебания обусловлены изменениями гормонального фона.

Зная и учитывая эти ритмы, можно повысить диа­гностическую ценность иммунологических показате­лей. Иммунный статус подвержен возрастным изме­нениям. Так, например, тимус рассматривается как «биологические часы» иммунной системы. Возрастная инволюция тимуса означает медленное угасание Т-клеточных функций по мере старения. Способность к распознаванию своего с возрастом постепенно угаса­ет, в связи с чем старение иногда даже рассматривается как хронически текущая аутоагрессия. Частота обна­ружения аутоантител с возрастом нарастает.

Иммунный статус изменяется также после травм и хирургических операций; через 24—48 ч после опера-

тивного вмешательства или травмы уменьшается ко­личество Т-лимфоцитов, нормализация их количест­ва происходит не ранее чем через 5 дней. Аналогично изменяется иммунный статус при стрессе.

Несмотря на исключительную вариабельность им­мунологических показателей даже в норме, индивиду­альную иммунореактивность можно охарактеризовать с помощью многочисленных лабораторных тестов, клеточное и гуморальное звено иммунной системы, а также факторы неспецифической резистентности. Оценка иммунного статуса в клинике имеет важное значение при трансплантации органов и тканей; для выявления иммунологической недостаточности; при аутоиммунных и аллергические болезнях для контро­ля за эффективностью иммуномодулирующей тера­пии; при назначении лечения (оперативное вмеша­тельство, облучение и др.). Клинические показания к постановке иммунологических тестов при некоторых болезнях приведены в табл. 15.3.

Оценка иммунного статуса чаще всего бази­руется на комплексе следующих показателей:

1. Данные общего клинического обследова­ния: жалобы, анамнез, клиника, методы физи-кального исследования, общий анализ крови.

2. Оценка факторов неспецифической резис­тентности: фагоцитарная реакция, НСТ-тест, хемилюминесценция, титрование комплемен­та, определение интерферона и др.

3. Оценка гуморального иммунитета: оп­ределение концентрации иммуноглобулинов разных классов в сыворотке крови, опреде­ление титров специфических антител, ката­болизм иммуноглобулинов, определение ко­личества В-лимфоцитов, В-клеточная бласт-трансформация и др.

4. Оценка клеточного иммунитета: поста­новка кожных аллергологических проб, кон­тактная сенсибилизация динитрохлорбензо-лом, определение количества Т-лимфоцитов, определениесубпопуляцийТ-лимфоцитов(Т₄, Т₈, соотношение Т₄/Т₈), Т-клеточная бласт-трансформация, продукция интерлейкинов и др.

5. Дополнительные тесты.

При рациональном и целенаправленном применении лабораторные иммунологичес­кие тесты могут приносить большую пользу в постановке диагноза.