Пиши Дома Нужные Работы

Обратная связь

МИКРОСКОПИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ НАТИВНЫХ ПРЕПАРАТОВ

Микроскопическое исследование спермы проводится после разжижения, но не позже одного часа после эякуляции. Если семенная жидкость при комнатной температуре не разжижается, ее необходимо поставить в термостат при температуре 37°С на несколько минут. Раз­жиженную сперму тщательно перемешивают пастеровской пипет­кой, избегая пенообразования. Одну каплю материала наносят на чистое сухое предметное стекло и покрывают покровным. Исследу­ет под микроскопом с увеличением 40x10 при полуопущенном конденсоре. В препаратах, приготовленных из нормальной спермы, видно большое количество подвижных сперматозоидов, имеющих грушевидную головку, шейку (тело) и хвост. Если в нативном препа­рате сперматозоиды не обнаруживаются, то эякулят центрифугиру­ют при 3000 об./мин в течение 10 мин, из полученного осадка готовят мазки.

При микроскопии устанавливают:

1. наличие или отсутствие сперматозоидов;

2. среднее количество сперматозоидов на одно поле зрения;

3. характер подвижности сперматозоидов;

4. наличие агглютинации (склеивание единичных сперматозоидов оценивается как (1+). Если склеена половина сперматозоидов, но только головками - как (2+), если половина сперматозоидов скле­ена головками и хвостами — как (3+), если склеены почти все сперма­тозоиды - как (4+). В нормальном эякуляте агглютинация не выявля­ется.)

Клетки сперматогенеза в нативном препарате плохо дифференци­руются, поэтому их исследуют только в окрашенном мазке. В нор­мальном эякуляте клетки сперматогенеза составляют 0,5—2% от коли­чества сперматозоидов.

Эритроциты в норме отсутствуют или единичные в препарате;



Лейкоциты в нормальном эякуляте бывают единичными в поле зрения;

Эпителиальные клетки в нормальном эякуляте могут быть обнару­жены в незначительном количестве. При воспалительных процессах их количество увеличивается;

Макрофаги обнаруживаются при воспалительных процессах и при застое спермы;

Липоидные тельца («лецитиновые зерна») — мелкие матовые обра­зования округлой формы, в нормальном эякуляте содержатся в зна­чительном количестве, отражают гормональную функцию простаты;

Амилоидные тельца (конкременты) имеют овальную или округлую форму, напоминают зерна крахмала, центральная часть их мелкозер­нистая желтого цвета. Обнаруживаются при застое секрета предста­тельной железы;

Кристаллы Беттхера - бесцветные удлиненной формы, образуются при охлаждении эякулята в случае недостаточного сперматогенеза или при простатите;

Слизь в нормальном эякуляте отсутствует.

Определение количества сперматозоидов.

Определение количества сперматозоидов в 1 мл и во всем эякуляте - подсчет обездвиженных сперматозоидов осуществляется в камере Горяева.

Реактивы для обездвиживания сперматозоидов.

1) 1,0 мл 40% нейтрального формалина и 100 мл дистиллированной воды.

2) 1,0 мл формалина, 5,0 г бикарбоната натрия, вода до 100 мл.

3) Жидкость Рубенкова: 0,1 г основного фуксина, 0,02 мл краски Романовского, 0,2 мл концентрированной карболовой кислоты - 0,1 мл глицерина, 2 мл 96% этанола, 100 мл 9 г/л хлорида натрия. Эта жидкость окрашивает сперматозоиды, что позволяет наряду с подсчетом общего количества сперматозоидов изучить их морфологию.

Эякулят после перемешивания разводят в 20 раз раствором для обездвиживания сперматозоидов в пробирке. Тщательно перемешивают и заполняют заранее подготов­ленную счетную камеру Горяева. Через несколько минут производят подсчет сперма­тозоидов в пяти больших разграфленных квадратах, расположенных по диагонали при увеличении: окуляр 7, объектив 40 с опущенным конденсором. Подсчитывают только те сперматозоиды, головки кото­рых лежат внутри квадратов. Полученное число умножают на 106, в результате получают количество сперматозоидов в 1 мл эякулята, а затем умножают на объем эякулята и получают общее количество сперматозоидов.

В норме в 1 мл спермы содержится 60—120*106 спер­матозоидов, во всем эякуляте количество сперматозоидов превышает 120*106, в среднем 150-450*106.

Определение подвижности сперматозоидов.

Подвижность в нормальной семенной жидкости очень активная и сохраняется до 24 часов при комнатной температуре. Кинезисграмма — это процентное соотношение сперматозоидов с различной подвижностью. Активно подвижные сперматозоиды обладают быстрым целесообразным поступательно-вращательным движением с перемещением в поле зрения. Малоподвижные сперматозоиды двигаются медленно, совершая колебательное, манежное движение или подергивание на месте. Неподвижные (мертвые) сперматозоиды не двигаются совсем.

Исследование проводят при температуре 20—25°С. На сухое предметное стекло наносят каплю перемешанного эякулята, покрывают покровным стеклом, избегая попадания пузырь­ков воздуха. Подсчитывают в нескольких полях зрения не менее 100 клеток, отмечая количество активноподвижных, малоподвижных и неподвижных. Рассчитывают процентное соотношение спермато­зоидов с различной подвижностью.

Для общей визуальной оценки можно использовать шкалу в бал­лах: 4 — активная подвижность (все сперматозоиды обладают прямо­линейной подвижностью со значительной скоростью), 3 — хорошая подвижность (большинство сперматозоидов обладает прямолиней­ной подвижностью, но она несколько снижена), 2 — посредственная подвижность (небольшое количество двигается поступательно), 1 - плохая подвижность (поступательное движение сперматозоидов отсутствует), 0 - полное отсутствие движения сперматозоидов.

В норме активно подвижные сперматозоиды составляют от 60 до 80-90%, малоподвижные – 10-20%, неподвижные – не более 10%.

Определение мертвых и живых сперматозоидов:окрашивание по Блуму

На предметное стекло наносят каплю спермы, рядом две капли водного раствора кислого (50 г/л) эозина, капли смешивают, через несколько секунд добавляют каплю водного раствора нигрозина (100 г/л), перемешивают и через несколько секунд делают тонкий мазок при помощи шлифованного стекла. Мазок высушивают и иссле­дуют с помощью иммерсионного объектива. Подсчитывают не менее 200 клеток, выделяя отдельно живые и мертвые сперматозоиды. Мер­твые сперматозоиды окрашены в красно-фиолетовый цвет, живые - бесцветные.

В нормальном эякуляте живые сперматозоиды составляют 90—95% от общего количества.

Стимуляция подвижности сперматозоидов («оживление»)

При обнаружении в эякуляте большого количества живых сперматозоидов при плохой подвижности, проводят пробу с «оживляющим» раствором (например, с раствором кофеина 1,0 г/л). Эякулят разбавляют «оживляющим» раствором 1:9, помещают в термостат при температуре 37о на 60 минут. После инкубации подсчитывают процент подвижности сперматозоидов.

В норме не менее 60% сперматозоидов активно подвижны.

МИКРОСКОПИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ ОКРАШЕННЫХ ПРЕПАРАТОВ

(окраска по Паппенгейму)

На мазок наносят раствор краски-фиксатора Мая—Грюнвальда на 3 мин. Затем препарат ополаскивают водой и заливают на 5—10 мин рабочим раствором краски Романовского. Препарат промывают проточной водой, высушивают и исследуют сиспользованием иммерсионной системы.

В окрашенном препарате подсчитывают не менее 200 сперматозо­идов и выражают в процентах количество нормальных и патологиче­ских форм, количество клеток сперматогенеза.

1. Молодые или незрелые формы сперматозоидов имеют вокруг головки и шейки остаток цито­плазмы («воротничок» или «капюшон»), наблюдаются при частых половых сно­шениях и неспособны к оплодотворению. В норме незрелые сперматозоиды вставляют не более 2%.

2. Старые формы сперматозоидов с гиперхромией, ахромией, вакуолиза­цией головки появляются в семенной жидкости после продолжительного полового воздержания и непригодны для оплодотворения. В нормальном эякуляте их не более 4%.

3. К патологическим формам относят сперматозоиды: макро-, микро-, кони­ческие головки, клювовидные, двугла­вые с одной шейкой и хвостом, с раздво­енными головками, без шейки, с утол­щенной, изогнутой шейкой, с несколь­кими хвостами, без акросомы или без ядра и др. У здоровых мужчин с нормальной спермой патологические формы спер­матозоидов обычно не встречаются, но их количество при нормоспермии может достигать не более 20%. Среди патологических форм нормального эякулята 10-15% приходится на патоло­гию головки, 2-5% - тела, 2-9% - хво­ста.

Клетки сперматогенеза в нормальной сперме составляют 0,5—2% по отношению к количеству сперматозоидов, сперматогониив норме не обнаружива­ются, встречаются обычно сперматиды.

Микроскопическое исследование спермы выявляет следующие состояния: аспермия— отсутствие в сперме сперматозоидов и клеток сперматогенеза; азооспермия — отсутствие сперматозоидов при нали­чии клеток сперматогенеза; астеноспермия— характеризуется сниже­нием процента активноподвижных сперматозоидов; олигозооспермия — уменьшение количества сперматозоидов в 1 мл эякулята; тератоспермия - увеличение процента патологических форм сперматозо­идов; некроспермия — увеличение количества мертвых сперматозои­дов; акинезис — состояние, при котором неподвижные сперматозоиды после «оживления» начинают двигаться.

 






ТОП 5 статей:
Экономическая сущность инвестиций - Экономическая сущность инвестиций – долгосрочные вложения экономических ресурсов сроком более 1 года для получения прибыли путем...
Тема: Федеральный закон от 26.07.2006 N 135-ФЗ - На основании изучения ФЗ № 135, дайте максимально короткое определение следующих понятий с указанием статей и пунктов закона...
Сущность, функции и виды управления в телекоммуникациях - Цели достигаются с помощью различных принципов, функций и методов социально-экономического менеджмента...
Схема построения базисных индексов - Индекс (лат. INDEX – указатель, показатель) - относительная величина, показывающая, во сколько раз уровень изучаемого явления...
Тема 11. Международное космическое право - Правовой режим космического пространства и небесных тел. Принципы деятельности государств по исследованию...



©2015- 2017 pdnr.ru Все права принадлежат авторам размещенных материалов.