Обнаружение редуцирующих веществ в вытяжке из моркови

Лабораторное занятие №6. Структура и функции липидов и углеводов.

Качественные реакции на липиды

Уже сказано, что преобладание углеводородных групп в веществах класса липидов сильно ограничивает их растворимость в воде и разнообразие, характерных для них качественных реакций. Поэтому работу с липидами проводят под тягой, извлекая их из образцов экстракцией, с помощью органических растворителей и их смесей: гексана, метиленхлорида, хлороформа, метанола и др. Посуда для работы с ними, должна быть не только чистой, но градуированной, оснащенной притертыми пробками и абсолютно сухой.

В курсе органической химии изучались реакции выявления карбоксильных групп и двойных связей ВЖК, соответственно с помощью титрования щелочами и галогенпроизводными. Наличие и количество фосфатных групп в фосфо- и сфинголипидах, устанавливают по реакции с молибденовокислым аммонием (см. Занятие 12). Поэтому рассмотрим подробней, лишь работу со стеролами, распространенными у всех эукариот. Как и другие липиды, стеролы, не растворимы в воде, но взаимодействуют с нею (1:100 молекул), образуя стойкие непрозрачные эмульсии.

1. Качественные реакции со стеролами выполняют в вытяжном шкафу, соблюдая правила работы с органикой и концентрированными кислотами.

1) Принцип пробы Сальковского. Под действием концентрированной серной кислоты, ХС дегидратируется в холестерилен, имеющий красную окраску. Его дальнейшая конденсация в бихолестандиен вызывает флуоресценцию в зелёной области спектра, позволяя обнаружить микроколичества (10^-7 – 10^-9 М/л), например стероидных гормонов в биожидкостях.

Ход работы:

1. Внести в чистую сухую пробирку 0,1-0,2 мл хлороформного экстракта мозга крыс.

2.Осторожно по каплям, добавить такой же объем концентрированной серной кислоты. Перемешать и зарегистрировать окраску.

2) Принцип реакции Либермана – Бурхарда – тот же, что и у предыдущей. Однако, в присутствии уксусного ангидрида, бихолестандиен образует сульфопроизводное зеленого цвета. Эта реакция менее чувствительна (10^-4 – 10^-6 М/л) и применяется для колориметрических методов определения ХС.

Ход работы: 1. В пробирку с 0,1-0,2 мл хлороформного экстракта мозга крыс добавить 3-5 капель уксусного ангидрида и 2-3 капли концентрированной серной кислоты. Содержимое перемешать и через 5 мин, зарегистрировать развитие окраски.

3) Принцип качественной реакции Петтенкофера на желчные кислоты: В присутствии концентрированной серной кислоты, из фруктозы и ее производных возникает гидроксиметилфурфурол, дающий с желчными кислотами пурпурную окраску.

Ход работы:

1. На дно сухой чашки Петри или часового, но не предметного стекла, нанести одну каплю желчи и каплю 20 % раствора сахарозы.

2. Хорошо перемешать их стеклянной палочкой.

3. Не сдвигая с места чашки/стекла, нанести рядом 3 капли концентрированной серной кислоты.

4. Наблюдать через 1-3 мин., в месте контакта капель, развитие красной окраски, при стоянии переходящей в красно-фиолетовую.

Качественная реакция на кетоновые тела

К кетоновым телам относят ацетон, ацетоуксусная и β-гидроксимасляная кислоты. Содержание в крови: ацетона – 2%, ацетоуксусная кислота – 20% и β-гидроксимасляная кислота – 78%. Кетоновые тела появляются в моче (кетонурия) при увеличении их содержания в крови (кетонемия).

3. Обнаружение ненасыщенных жирных кислот в растительном масле

Обнаружение стеролов в растительном масле

Внимание! Работа с легко летучими веществами и концентрированными кислотами проводится в вытяжном шкафу.

Ход работы

В сухую пробирку вносят 2 капли подсолнечного масла, 20 капель хлороформа. Добавляют 20 капель смеси концентрированной серной кислоты с формалином (50:1) и взбалтывают. Раствор разделяется на два слоя: хлороформный (вишневого цвета) и серной кислоты (красно-коричневого цвета с зеленой флуоресценцией). Из верхнего хлороформного слоя отбирают 5-6 капель в сухую пробирку, добавляют 1-2 капли уксусного ангидрида и наблюдают появление синего окрашивания, переходящего в зеленое.

Качественные реакции на углеводы.

Реакция Троммера

Реакция позволяет обнаружить сахара как многоатомные спирты, а так же оксосоединения по их восстановительным свойствам.

Ход работы

В пробирку налить 1-2мл 1% р-ра глюкозы, добавить равный объем 10% р-ра гидроксида натрия, при встряхивании добавлять по каплям 1% р-р сульфата меди (II). В присутствии глюкозы, образующийся осадок гидроксида меди (II) растворяется, окрашивая жидкость в голубой цвет (реакция на многоатомные спирты). При нагревании верхнего слоя, появляется желтый гидроксид меди (I), а затем красный осадок оксида меди (I), свидетельствующий о положительной реакции Троммера (реакция на альдегидную группу).

В другой пробирке для качественных реакций смешать 1 мл 10% р-ра гидроксида натрия с несколькими каплями 1% р-р сульфата меди (II). Полученный осадок голубого цвета при нагревании перейдет в осадок черного цвета оксида меди (II). Поэтому при реакции Троммера следует избегать избытка сульфата меди, т.к. реакция между редуцирующим углеводом и гидроксидом меди (II) идет количественно. И при нагревании гидроксид меди (II) теряет воду и переходит в черный оксид меди (II), что мешает проведению реакции Троммера и является показателем неправильно проведенной реакции.

Выявление специфичности амилазы

1. В 2 маркированных пробирки поместить по 5 капель слюны, разведенной в 10 раз.

2. В одну из них добавить 10 капель 0,2 % раствора крахмала, а в другую – столько же 0,2 % раствора сахарозы.

3. Пометив свою пару пробирок, поместить ее на 10 мин для инкубации, в штатив водяной бани с качалкой, при 40 С (313 К) или подогреть на пламени.

4. Вынув пробирки из бани, для выявления в них сахаров с восстанавливающими свойствами, проделать с содержимым качественную реакцию Троммера. Для этого, соблюдая осторожность:

5. Соблюдая правила нагрева посуды в пламени, прокипятить содержимое обеих пробирок на тигле с сухим горючим, зарегистрировать результаты и, занести их в протокол опыта для последующего истолкования.

Обнаружение редуцирующих веществ в вытяжке из моркови

При нагревании водной вытяжки из моркови с реактивом Феллинга появляется желтый осадок гидрата закиси меди или красный осадок закиси меди, что обусловлено наличием глюкозы и других редуцирующих веществ, способных восстанавливать гидрат окиси меди в закись.

Ход работы

Морковь натереть на терке, около 0,5 г полученной массы помещают в пробирку, добавляют 2 мл воды и кипятят 3-4 мин. Жидкость отфильтровывают.

С полученного фильтрата проводят реакцию Феллинга. В основе реакции лежат восстановительные свойства сахаров, обусловленные альдегидной группой.

К 1 мл полученного фильтрата прилить равный объем реактива Феллинга и переешать. Верхний слой жидкости нагреть до кипения. Появиться, как в реакции Троммера, желтый осадок гидроксида меди (I), переходящий в красный осадок оксида меди (I).