В рабочую тетрадь законспектировать принципы гистологической обработки материала. ВВЕДЕНИЕ
Учебно-методическое пособие разработано на основе ФГОС ВПО, утвержденного в 2010 г. по специальности 31.05.01 «Лечебное дело» высшего профессионального образования, рабочей программы по дисциплине «Гистология, цитология, эмбриология».
Процесс изучения дисциплины направлен на формирование у выпускника общих и профессиональных компетенций:
ОК- 1. способности и готовности анализировать социально-значимые проблемы и процессы, использовать на практике методы гуманитарных, естественнонаучных, медико-биологических и клинических наук в различных видах профессиональной и социальной деятельности;
ПК - 1. способности и готовности реализовать этические и деонтологические аспекты врачебной деятельности в общении с коллегами, средним и младшем медицинским персоналом, взрослым населением и подростками их родителями;
ПК - 9. способности и готовности к работе с медико-технической аппаратурой, используемой в работе с пациентами, владеть компьютерной техникой,получать информацию из различных источников, работать с информацией в глобальных компьютерных сетях; применять возможности современных информационных технологий для решения профессиональных задач;*
ПК - 16. способностью и готовностью анализировать закономерности функционирования отдельных органов и систем, использовать знания анатомо-физиологических основ, основные методики клинико-иммунологического обследования и оценки функционального состояния организма взрослого человека и подростка для своевременной диагностики заболеваний и патологических процессов;
ПК- 27. способности и готовности использовать нормативную документацию принятую в здравоохранении (законы Российской Федерации, технические регламенты, международные и национальные стандарты, приказы, рекомендации, терминологию, международные системы единиц (СИ), действующие международные классификации), а также документацию для оценки качества и эффективности работы медицинских организаций;*
ПК- 31. способности и готовности изучать научно-медицинскую информацию, отечественный и зарубежный опыт по тематике исследования;
ПК-32. способности и готовности к участию в освоении современных теоретических и экспериментальных методов исследования с целью создания новых перспективных средств, в организации работ по практическому использованию и внедрению результатов исследований[*].
Целью практических занятий по общей гистологии является обучение студентов навыкам микроскопии, диагностики гистологических препаратов тканей, органов человека и животных.
С целью унификации преподавания дисциплины и повышения качества знаний студентов в настоящем пособии используется единая структура практических занятий, включающая постановку цели и задач, обсуждение значимости и актуальности материала занятия, контроль исходного уровня знаний студентов, разбор основополагающих вопросов темы и практическую часть. При выполнении микроскопической диагностики и зарисовки гистологических препаратов, студентам предлагается использовать подробное описание микроскопической картины, представленное в данной учебно-методическом пособии. Для каждой темы указаны гистологические схемы, таблицы, подлежащие зарисовке. Обязательным является контроль правильности диагностики студентами гистологических препаратов и оформления протоколов микроскопии.
Предложенная структура занятия позволяет максимально использовать принципы самостоятельного изучения предмета, оптимально организовать работу студента как при подготовке к занятию, так и в процессе его проведения.
Учебно-методическое пособие предназначено для студентов лечебного факультета для работы на практических занятиях по общей гистологии.
РАЗДЕЛ 1. Введение в дисциплину. Цитология. Общая эмбриология
ЗАНЯТИЕ № 1. Введение в дисциплину. Объекты и методы исследования
ЦЕЛЬ: сформировать представления о гистологии как науке, ее значении в системе медицинского образования и клинической медицины, сущности методов гистологического анализа.
Работа на практическом занятии обеспечивает формирование у студента следующих профессиональных компетенций: ПК-1, ПК-9, ПК-16, ПК-27, ПК-31, ПК-32[†].
В результате работы на практическом занятии студент должен знать:
· сущность гистологии как науки, ее значение в системе высшего медицинского образования и клинической медицины;
· методы исследования в гистологии;
· принципы гистологической обработки материала;
· принципы окраски гистологических препаратов и тинкториальные свойства гистологических структур;
· устройство светового микроскопа;
уметь микроскопировать:
· гистологический препарат щитовидной железы;
уметь рисовать схемы гистологического строения:
· щитовидной железы.
Теоретические вопросы для обсуждения на занятии
1. Гистология как наука: предмет и методы.
2. Место гистологии в системе медико-биологических и медицинских дисциплин.
3. Основоположники гистологии, основные отечественные гистологические школы: Московская, Петербургская, Казанская, Киевская и др. История кафедры гистологии ХМГМА и ее научное направление.
4. Устройство светового микроскопа. Правила микроскопии.
5. Основные этапы приготовления гистологических препаратов.
6. Принципы окраски гистологических препаратов. Классификация красителей. Понятия «оксифилия» и «базофилия».
Значимость изучаемой темы
Гистология является теоретической основой изучения многих медико-биологических (патологической анатомии, биохимии, нормальной и патологической физиологии) и клинических дисциплин. В настоящее время в медицинской практике при обследовании больного используются гистологические методы диагностики, основанные на микроскопическом изучении тканей и органов человека и позволяющие наиболее точно поставить диагноз. Гистологический диагноз является окончательным диагнозом в медицине. Овладение знаниями по гистологии не мыслится без изучения микро- и ультрамикроскопических структур с помощью светового и электронного микроскопов. Гистологические исследования дают наиболее объективные сведения о состоянии тканей и органов человека и о происходящих в них процессах.
Необходимым условием успешного проведения гистологического анализа является строгое соблюдение методики изготовления гистологического препарата, а также наличие навыков техники микроскопирования. Студент на практическом занятии должен приобрести опыт микроскопирования, научиться анализировать гистологические препараты и делать правильные выводы по результатам микроскопии.
При изучении гистологического препарата необходимо учитывать то, что в поле зрения микроскопа элементы тканевых структур представляются чаще всего в разрезе. Воссоздать целостность объекта после его рассмотрения можно путем воображаемой реконструкции в сознании исследователя. В отдельных случаях структура может быть воспроизведена с помощью графической, пластической, компьютерной реконструкций по строго последовательным (серийным) срезам или изображениям. Студент должен стремиться выработать навык трехмерного представления наблюдаемых микроскопических структур. При этом всегда необходимо учитывать плоскость среза (фронтальная, сагиттальная, тангенциальная) наблюдаемой структуры.
Изучение препаратов должно сопровождаться их зарисовкой. Это помогает сосредоточить внимание на изучаемых объектах, выделить их со всеми деталями из окружающего. Зарисовка включает в себя элемент самоконтроля и подтверждает иди документирует факт микроскопии и освоения студентом препарата. Документирование микроскопической картины - это важный методический прием при исследовании клеток, тканей, органов.
В рабочую тетрадь законспектировать принципы гистологической обработки материала.
Принципы гистологической обработки материала.
Предметом гистологического анализа является гистологический препарат. Гистологический препарат – это тонкий срез кусочка органа или ткани, подвергнутый специальной гистологической обработке.
1. Взятие материала для приготовления гистологического препарата. Материал для приготовления гистологического препарата может быть забран от трупа человека или животного в ходе патологоанатомического вскрытия, а также от живого организма путем биопсии. Из органа вырезается кусочек, размеры которого не должны превышать 1см3. Обязательным условием является работа со свежим материалом, без предварительной заморозки и посмертных изменений.
2. Фиксация материала. Фиксация проводиться для того, чтобы остановить в вырезанном кусочке органа протекающие жизненные процессы, стабилизировать структуры в прижизненном состоянии и предупредить последующий их распад. В качестве фиксаторов используются жидкие химические вещества: этанол, метанол, ацетон, формалин, формальдегид, соли тяжелых металлов. Также могут использоваться сложные фиксаторы, состоящие из смеси химических веществ: фиксаторы Карнуа, Буэна, Лили, Серра и т.д. Объем фиксирующей жидкости должен в 20 раз превышать объем кусочка.
3. Обезвоживание, обезжиривание и уплотнение материала. На этом этапе из материала удаляется вода. Этот процесс осуществляется в спиртах возрастающей концентрации и в смеси спирта с эфиром в следующей последовательности: 50% этанол → 70% этанол → 96% этанол (I) → 96% этанол (II) → 100% этанол → 100% этанол + эфир (I) → 100% этанол + эфир (II). В каждом отмеченном растворе кусочек находится не менее суток. В последующем кусочки материала уплотняются, путем пропитывания парафином, целлоидином, желатином или другими пластическими массами.
4. Заливка материала. Заливка материала производиться в парафин, целлоидин или желатину для того, чтобы предать ему такую консистенцию, чтобы этот материал можно было резать на очень тонкие пластинки - гистологические срезы. Залитый материал может долго храниться. Чаще всего заливают в парафин. Вначале материал пропитывают жидким парафином в термостатах при высокой температуре, затем на воздухе при комнатной температуре заливают в парафин, который застывает и становиться твердым. Залитый материал называют гистологическим блоком.
5. Приготовление гистологических срезов. Залитый в парафин кусочек материала приклеивают на деревянную или пластиковую основу, укрепляют на предметном столике микротома. Микротом это прибор, оснащенный микротомным ножом, с помощью которого можно изготавливать гистологические срезы толщиной 3-5 микрометров.
6. Окраска гистологических срезов. Перед окрашиванием гистологических срезов из последних следует удалить частицы затвердевших сред. Срезы, полученные из парафиновых блоков, депарафинируют ксилолом, а затем окрашивают. Клетки и ткани животного происхождения обладают избирательной способностью воспринимать разные красители. Это позволяет определять в окрашенном препарате различные структуры.
Красители по химическим свойствам делятся на кислые и основные красители.
К группе кислых красителей относятся эозин, кислый фуксин, пикрофуксин, пикриновая кислота. Наиболее распространенный кислый краситель – эозин. Эозин окрашивает протоплазму, оболочку клеток, межклеточное вещество соединительной ткани в розовый цвет. Микроскопические структуры, окрашиваемые эозином и подобными ему красителями, называются эозинофильными или оксифильными или ацидофильными. Способность воспринимать эти красители называется эозинофилией или оксифилией или ацидофилией.
К группе основных красителей относятся: гематоксилин кармин, сафранин, метиловый синий, азур. Наиболее распространенный краситель этой группы – гематоксилин. В зависимости от способа приготовления красителя различают гематоксилин Майера, Бемера, Вейгерта, железный гематоксилин Гейденгайна. Красящие свойствами обладают не сам гематоксилин, а продукт его окисления. Гематоксилин окрашивает структуры в синий или фиолетовый цвет. Структуры, окрашиваемые основными красителями, будут называться базофильными. Свойство воспринимать эти красители называется базофилией.
Окраска препаратом гематоксилином и эозином называется обзорной окраской и является наиболее распространенной.
Существуют красители со специальными свойствами, позволяющие выявлять содержание разных химических веществ в клетке. Судан-3 окрашивает жировые включения в оранжевый цвет. Осмиевая кислота окрашивает жир в черный цвет. Импрегнация азотнокислым серебром нервной ткани позволяет выявить ее компоненты, окрашиваемые черным цветом. Гликоген выявляется кармином Беста. Такие методики окраски называются гистохимическими.
7. Обезвоживание, просветление и заключение окрашенных срезов в бальзам. Окрашенные срезы обезвоживают в 2-х порциях 96 % этанола и просветляют в карбол-ксилоле. Для дальнейшего изучения окрашенные препараты заключить в консервирующую среду. Для этих целей используется продукты смолы хвойных деревьев, так называемые бальзамы: канадский, пихтовый, кедровый бальзам. Также могут использоваться синтетические смолы.
На предметное стекло на окрашенный срез наносят каплю бальзама и покрывают покровным стеклом. Препарат готов для исследования и может храниться долгое время.
Освоение техники окраски гистологических препаратов
С помощью приведенных ниже методик самостоятельно окрасить препарат.
Методики самостоятельной окраски препаратов из животных тканей (парафиновый препарат)
1. Ксилол 2 мин.
2. Спирт 96% 2 - мин.
3. Гематоксилин 5-15 - мин.
4. Вода водопроводная 5 - мин.
5. Эозин 1 - мин.
6. Вода дистиллированная 1 - мин.
7. Спирт 96 % 1 - мин.
8. Спирт 96% 1 - мин.
9. Ксилол 1 - мин.
10. Заключить срез в бальзам.
Освоение навыков микроскопии и зарисовки гистологических препаратов
В рабочие тетради законспектировать правила работы с микроскопом.
Правила работы с микроскопом
1. Работать за микроскопом следует сидя.
2. Микроскоп осмотреть, вытереть от пыли чистой сухой марлевой салфеткой окуляры, объективы, зеркало.
3. Микроскоп установить перед собой, на 2-3 см от края стола. С правой стороны расположить открытый альбом для практических занятий.
4. Включить подсветку, отрегулировать яркость подсветки.
5. Привести микроскоп в рабочее состояние:
а. поднять конденсор до предела, открыть полностью диафрагму;
б. установить объектив малого увеличения на расстоянии 1-1,5см от предметного столика;
в. свести окуляры к такому расстоянию, чтобы, смотря в них двумя глазами, получить одно поле зрения.
6. Поместить препарат на предметный столик микроскопа покровным стеклом кверху (обратить на это внимание). Передвигать препарат с помощью рукоятки перемещения предметного столика так, чтобы найти место, подлежащее к изучению.
7. Опустить конденсор до положения, обеспечивающего наилучшее освещение препарата на “малом” увеличении.
8. Рассмотреть препарат с помощью 10-кратного объектива, который чаще будет называться “малым увеличением”. Найти место, подходящее для изучения при большом увеличении, поставить его в центр поля зрения. Отрегулировать резкость микровинтом.
9. При переходе с меньшего увеличения на большее необходимо, не меняя фокусного расстояния, повернуть револьверную головку объективов так, чтобы в рабочее положение встал 40-кратный объектив («большое увеличение»). Микровинтом добиться резкого изображения. Работа с макровинтом на большом увеличении запрещается, т.к. легко можно раздавить препарат.
10. Левая рука должна находиться на микрометрическом винте, слегка поворачивая его в обе стороны для просматривания деталей среза лежащих на разной глубине поверхности среза.
11. Запрещается убирать препарат из под объектива большого увеличения. Для того чтобы убрать препарат с предметного столика микроскопа в рабочее положение ставится малый объектив и препарат снимается со столика микроскопа.
12. Запрещается развинчивать какие-либо части микроскопа. В случае неисправности микроскопа обращаться к преподавателю.
Соблюдая указанные правила микроскопии, изучить с помощью микроскопа гистологический препарат щитовидной железы. Зарисовать в рабочую тетрадь видимую микроскопическую картину.
ПРЕПАРАТ № 197. Щитовидная железа собаки
|