Окраска: гематоксилин и эозин

1. Протрите поверхность препарата марлевой салфеткой.

2. Расположите препарат на предметном столике микроскопа покровным стеклом вверх.

3. Получите изображение препарата с использованием 8-10-кратного объектива. В дальнейшем это будет называться «малым» увеличением. Макровинтом отрегулировать резкость изображения.

4. Оцените форму, размеры, общую картину среза.

5. Учитывая, что микроскопируется срез, необходимо представить видимые структуры в объемном изображении. Таким образом, долька щитовидной железы состоит из фолликулов. Это сферические пузырьки, которые на срезе имеют вид круглых или овальных структур, заполненных содержимым - коллоидом. Между фолликулами расположена соединительная ткань, состоящая из межклеточного вещества, окрашенного эозином, и клеток, ядра которых окрашены гематоксилином, а цитоплазма - эозином.

6. После изучения препарата на малом увеличении, необходимо провести микроскопию с использованием 40-кратного объектива. В дальнейшем это будет называться «большим» увеличением. Разрешающая способность микроскопа не позволяет в большинстве случаев рассмотреть оболочки клеток. В связи с этим необходимо помнить закономерность, в соответствие с которой форма ядра клетки повторяет форму клетки. В клетках шаровидной, кубической формы ядро округлое, в клетках цилиндрической, вытянутой формы ядро вытянутое, эллипосоидное, палочковидное. Стенка фолликулов образована одним слоем кубических клеток. Между фолликулами в соединительной ткани по форме ядер можно установить наличие веретенчатых и круглых клеток. Чтобы подойти осмысленно к изучению препаратов, необходимо знать теоретический материал по строению микроскопируемых структур.

7. Обратите внимание на избирательность окраски наблюдаемых структур. Ядра клеток проявляют базофильные свойства и окрашены гематоксилином в фиолетовый или темно синий цвет. Цитоплазма клеток проявляет оксифильные свойства и окрашена в розовый цвет эозином.

8. Следующим этапом работы является оформление рисунка изученного препарата. Зарисовку целесообразно проводить непосредственно с препарата, используя в качестве примера рисунки из Атласа по гистологии, цитологии и эмбриологии (С.Л. Кузнецов, Н.Н. Мушкабаров, В.Л. Горячкина, 2010), таблицы, рисунки, выполненные преподавателем на доске. При зарисовке необходимо соблюдать правильные соотношения в размерах отдельных частей объекта. Размер рисунка должен занимать примерно 1/4 часть страницы и располагаться с левой стороны в соответствие с предлагаемым ниже образцом рисунка и обозначений. Зарисовка производится цветными карандашами с учетом базофилии и оксифилии структур.

9. Зарисуйте 2-3 фолликула. Стенку фолликула и элементы соединительной ткани изобразите полусхематично, показывая при этом границы клеток, волокна.

10. После зарисовки сделайте обозначения основных структурных компонентов изучаемого объекта, использовать буквенные и цифровые символы, которые должны располагаться справа от рисунка.

Образец рисунка и обозначений

ПРЕПАРАТ № 197. Щитовидная железа собаки

Окраска: гематоксилин и эозин

Рисунок в атласе[‡] № 248.

ЗАНЯТИЕ № 2. Формы организации живой материи. Элементарная биологическая мембрана. Плазмолемма. Ядро клетки

ЦЕЛЬ: сформировать представление о принципах организации эукариотических клеток, доклеточных и неклеточных форм живой материи. Изучить структурно-функциональную организацию элементарной биологической мембраны, плазмолеммы, ядра клетки.

Работа на практическом занятии обеспечивает формирование у студента следующих профессиональных компетенций: ПК-1, ПК-9, ПК-16, ПК-27, ПК-31, ПК-32[§].

В результате работы на практическом занятии студент должен иметь представление:

· о химическом составе животной клетки;

знать:

· положения клеточной теории;

· структурно-функциональную организацию биологической мембраны и плазмолеммы;

· структурно-функциональную организацию ядра клетки;

уметь диагностировать на гистологических препаратах:

· клетки разной формы;

· межклеточное вещество;

· миосимпласт скелетной мышечной ткани;

· структурные компоненты ядра;

уметь диагностировать на электроннограммах:

· плазмолемму;

· клеточные контакты;

· структурные компоненты ядра;

уметь рисовать схемы гистологического строения:

· клеток крови;

· поперечно-полосатого мышечного волокна (симпласт);

· межклеточного вещества эластического хряща;

уметь рисовать схемы ультраструктурного строения:

· элементарной биологической мембраны;

· плазмолеммы;

· ядра клетки.

Теоретические вопросы для обсуждения на занятии

1. Определение понятия «клетка». Клеточная теория.
2. Обзор химического состава клетки.
3. Жидкостно-мозаичная липо-протеидная модель биологической мембраны. Химический состав, ультраструктурная организация, функции.
4. Плазмолемма. Строение, функции. Виды клеточных контактов.
5. Ядро клетки: ядерная оболочка, хроматин, ядрышко, ядерный матрикс.

Значимость изучаемой темы

Изучение основ цитологии, опирающихся на постулаты клеточной теории, необходимо для формирования представлений о животной клетке как структурно-функциональной единице ткани, органа и систем органов организма человека. Понимание закономерностей структурно-функциональной организации клетки необходимо для формирования научного биологического мышления врача, что является необходимым для постановки диагноза болезни, определения тактики и стратегии лечения больного.

Изучить гистологические препараты

Предлагаемые для микроскопии препараты иллюстрируют многообразие форм клеток организма человека, единство их структурно-функциональной организации. Также представлены препараты, демонстрирующие неклеточные формы (симпласт).

ПРЕПАРАТ № 76. Мазок крови.

Окраска: по Романовскому-Гимза.

Препарат представляет собой мазок крови человека.

Определите поверхность предметного стекла, на которую нанесён мазок крови. Найдите участок в мазке, где кровь распределена тонким слоем (область «метёлки»). Нанесите 1-2 капли иммерсионного масла на мазок в области «метёлки». Разместите препарат на предметном столике так, чтобы свет проходил через каплю иммерсионного масла.

Малое увеличение. Получите изображение препарата с помощью 10-кратного объектива. В поле зрения микроскопа обнаруживается большое количество безъядерных клеток, окрашенных эозином в розовый цвет, - это эритроциты,и клеток, имеющих ядра – это лимфоциты и лейкоциты.

Для детального анализа препарата используется 100-кратный иммерсионный объектив, позволяющий идентифицировать форменные элементы крови по их морфологическим особенностям. Поверните револьвер с объективами и установите объектив х100. Этот объектив предназначен для работы с иммерсионным маслом. При его установке он должен погрузиться в масло.

Большое увеличение. Получите чёткое изображение препарата на большом увеличении, используя макровинт. Эритроциты имеют форму двояковогнутого диска, поэтому на препарате их центральная часть светлее, а периферия темнее. Лимфоциты - клетки округлой формы, в цитоплазме которых присутствует базофильное округлое ядро, заполняющее большую часть цитоплазмы, узкий ободок которой виден по периферии клетки. Клетка, имеющая округлую форму, сегментированное ядро, нейтрофильную зернистость цитоплазмы, называется нейтрофильный сегментоядерный лейкоцит.

Рисунки в атласе №№ 11, 12, 94.

Препарат зарисовать и на рисунке обозначить:

1. Эритроцит:

1.1. цитоплазма.

2. Лимфоцит:

2.1. цитоплазма,

2.2. ядро.

3. Нейтрофильный лейкоцит:

3.1. цитоплазма;

3.2. ядро.

ПРЕПАРАТ № 108. Язык кролика. Поперечно-полосатые мышечные волокна.

Окраска: гематоксилин по Гейденгайну.

Препарат представляет срез кусочка языка кролика.

Малое увеличение. Получите изображение препарата с помощью 10-кратного объектива. В поле зрения микроскопа обнаруживается большое количество разных тканей и структурных компонентов языка, среди них преобладают окрашенные в черный цвет исчерченные скелетные мышечные волокна - миосимпласты. Необходимо найти волокна, разрезанные продольно и поперечно.

Большое увеличение. Рассмотрите детально строение миосимпластов на продольном и поперечном срезах. На продольном срезе миосимпласт имеет вытянутую, удлиненную форму. Его цитоплазма (саркоплазма) имеет поперечную исчерченность. В периферическом слое саркоплазмы располагается большое количество ядер. Миосимпласты на поперечном срезе имеют округлую или неправильную форму. Под оболочкой (сарколеммой) находятся 2-3 ядра.

Рисунки в атласе №№ 14а, б.

Препарат зарисовать и на рисунке обозначить:

1. Продольный срез миосимпласта:

1.1. сарколемма;

1.2. саркоплазма;

1.3. ядра;

1.4. исчерченность.

2. Поперечный срез миосимпласта:

2.1. сарколемма;

2.2. саркоплазма;

2.3. ядра.