Обратная связь
|
Методы микробиологической диагностики вирусных инфекций В вирусологии методы лабораторной диагностики вирусных инфекций имеют свою специфику, учитывая особенности биологии вирусов. В вирусологии используются три метода лабораторной диагностики:
• вирусоскопическии,
• вирусологический,
• серологический.
Вирусоскопический метод заключается в обнаружении вируса в исследуемом материале под микроскопом. Чаще всего используют электронный микроскоп, реже — люминесцентный. Световая микроскопия из-за ничтожно малых размеров вирусов практически не применяется. И лишь для обнаружения крупных вирусов, применяя методы «сверхокраски», можно использовать световой микроскоп. Кроме того, с помощью светового микроскопа можно выявить внутриклеточные включения, которые образуются в пораженных клетках при некоторых инфекциях.
Вирусологический метод заключается в заражении исследуемым материалом чувствительной биологической модели (лабораторные животные, куриные эмбрионы или культуры клеток), индикации вируса и его последующей идентификации. При заражении лабораторных животных индикация вирусов производится, как правило, по клинической картине болезни, патолого-ана-гомическим изменениям ориентировочно и окончательно, например, с помощью реакции гемагглютинации. Эта же реакция позволяет выявить вирусы в курином эмбрионе, видимых изменений при вскрытии которого, как правило, не наблюдается. В культуре кле-
ток наличие вируса определяют по цитопати-ческому действию (в том числе образованию внутриклеточных включений), гемадсорб-ции, феномену бляшкообразования, реакции гемагглютинации, отсутствию изменения окраски индикатора. Идентификация вируса осуществляется с помощью серологических реакций (РПГА, РТГА, РН, РСК, ИФА и др.). Вирусологический метод позволяет точно определить природу возбудителя, но он требует достаточного много времени (5—7 дней и более), значительных материальных затрат и небезопасен.
Особенностью серологического метода в вирусологии является исследование парных сывороток. Первую сыворотку берут у больного в острый период в начале болезни, хранят при температуре +4... +8 °С, а вторую сыворотку берут через 10—14 дней. Сыворотки исследуют одномоментно. О болезни свидетельствует сероконверсия, т. е. нарастание титра антител во второй сыворотке по отношению к первой. Диагностической является сероконверсия в 4 раза и выше. Так как многие вирусные болезни протекают остро, этот вариант серологического метода обычно применяют для ретроспективной диагностики.
Ведущим методом лабораторной диагностики вирусных инфекций является вирусологический.
Ускоренная и экспресс-диагностика вирусных болезней производятся так же, как при бактериальных инфекциях.
15.7. Особенности микробиологической диагностики микозов
Для диагностики грибковых инфекций обычно используют микологический метод. Он заключается в посеве патологического материала на специальные питательные среды, выделении чистой культуры возбудителя и ее идентификации по морфологическим, культуральным и биохимическим свойствам. Особенностью метода является его продолжительность — несколько недель из-за медленного роста грибов. Обнаружение антител при серологическом исследовании возможно со 2—4-й недели болезни. При некоторых заболеваниях выявляют специфические антигены в исследуемом материале. Аллергологический метод используют редко. Довольно часто при микозах используют гистологический метод, заключающийся в обнаружении элементов гриба (споры, конидиальные головки и т. п.) в органах и тканях, пораженных грибами. С этой целью готовят гистологические тонкие или ультратонкие срезы тканей, окрашивают их специальными гистологическими и гистохимическими методами и исследуют с применением световой, а если необходимо, то и электронной микроскопии.
15.8. Особенности микробиологической диагностикипротозойных инфекций
Микроскопическое исследование патологического материала заключается в приготовлении как нативных препаратов («толстая капля»), так и мазков, окрашенных по методу Романовского—Гимзы, и является основным методом диагностики заболеваний, вызванных простейшими. В некоторых случаях применяют серологический и аллергологический методы диагностики.
15.9. Принципы иммунологической диагностики болезней человека
Иммунологическая диагностика болезней человека основана на определении антигенов или антител в реакции антиген-антитело. Специфичность и чувствительность иммунологических реакций настолько высоки, что эти реакции легли в основу иммунометрии.
Так, например, методы иммунодиффузии, иммуноферментного и радиоиммунного методов стали стандартными методами количественного определения белков, гормонов и других биологически активных веществ.
Иммунодиагностика — раздел иммунологии, изучающий и разрабатывающий методы диагностики инфекционных и неинфекционных болезней, связанных с функцией иммунной системы.
Многие инфекционные заболевания в настоящее время претерпели существенные.изменения, что выражается в увеличении удельного веса легких, стертых и бессимптомных форм, росте аллергического компонента, высокой частоте микст-инфекций. Это затрудняет традиционную диагностику заболеваний, поэтому значимость иммунодиагностики, направленной на выявление антигенов возбудителя или специфических иммунных сдвигов в организме больного, возрастает.
Под иммунореактивностью (иммунный статус, иммунный профиль) понимают способность иммунной системы к иммунному ответу в данный момент времени. Ее характеризуют не только концентрация иммуноглобулинов, число лимфоцитов и лейкоцитов, соотношение Т- и В-клеток, но и функциональные показатели, в частности способность иммунокомпетентных клеток отвечать на стимуляцию.
Оценивая иммунный статус, следует иметь в виду большую вариабельность иммунологических показателей даже в норме. Следует отметить, что иммунологические параметры подвержены колебаниям в зависимости от биоритма. Эти колебания обусловлены изменениями гормонального фона.
Зная и учитывая эти ритмы, можно повысить диагностическую ценность иммунологических показателей. Иммунный статус подвержен возрастным изменениям. Так, например, тимус рассматривается как «биологические часы» иммунной системы. Возрастная инволюция тимуса означает медленное угасание Т-клеточных функций по мере старения. Способность к распознаванию своего с возрастом постепенно угасает, в связи с чем старение иногда даже рассматривается как хронически текущая аутоагрессия. Частота обнаружения аутоантител с возрастом нарастает.
Иммунный статус изменяется также после травм и хирургических операций; через 24—48 ч после опера-
тивного вмешательства или травмы уменьшается количество Т-лимфоцитов, нормализация их количества происходит не ранее чем через 5 дней. Аналогично изменяется иммунный статус при стрессе.
Несмотря на исключительную вариабельность иммунологических показателей даже в норме, индивидуальную иммунореактивность можно охарактеризовать с помощью многочисленных лабораторных тестов, клеточное и гуморальное звено иммунной системы, а также факторы неспецифической резистентности. Оценка иммунного статуса в клинике имеет важное значение при трансплантации органов и тканей; для выявления иммунологической недостаточности; при аутоиммунных и аллергические болезнях для контроля за эффективностью иммуномодулирующей терапии; при назначении лечения (оперативное вмешательство, облучение и др.). Клинические показания к постановке иммунологических тестов при некоторых болезнях приведены в табл. 15.3.
Оценка иммунного статуса чаще всего базируется на комплексе следующих показателей:
1. Данные общего клинического обследования: жалобы, анамнез, клиника, методы физи-кального исследования, общий анализ крови.
2. Оценка факторов неспецифической резистентности: фагоцитарная реакция, НСТ-тест, хемилюминесценция, титрование комплемента, определение интерферона и др.
3. Оценка гуморального иммунитета: определение концентрации иммуноглобулинов разных классов в сыворотке крови, определение титров специфических антител, катаболизм иммуноглобулинов, определение количества В-лимфоцитов, В-клеточная бласт-трансформация и др.
4. Оценка клеточного иммунитета: постановка кожных аллергологических проб, контактная сенсибилизация динитрохлорбензо-лом, определение количества Т-лимфоцитов, определениесубпопуляцийТ-лимфоцитов(Т4, Т8, соотношение Т4/Т8), Т-клеточная бласт-трансформация, продукция интерлейкинов и др.
5. Дополнительные тесты.
При рациональном и целенаправленном применении лабораторные иммунологические тесты могут приносить большую пользу в постановке диагноза.
Таблица 15.3. Клинические показанияк постановке иммунологических тестов при некоторых болезнях
| | Предположительный диагноз
| Иммунологический тест, рекомендуемый для подтверждения диагноза
| | Аутоиммунные заболевания, в том числе:
Коллагенозы
Общая диагностика
Частная диагностика
Системная красная волчанка
Склеродермия
Синдром Шегрена
Миастения
Аутоиммунный тиреоидит
Пузырчатка и пемфигоид
Аддисонова болезнь
Аутоиммунная гемолитическая анемия, тромбоцитопения, гемолитическая анемия с Холодовыми агглютининами, апластическая анемия
| Антинуклеарный фактор
С., криоглобулины Антитела к нативной ДНК Антитела к содержимому ядра (к РНК) Антитела к антигенам слюнных й щитовидной желез Антитела к поперечно-полосатым мышцам, ацетилхолино-вым рецепторам
Антитела к тиреоглобулину и микросомному антигену щитовидной железы
Антитела к межклеточному вешеству и базальной мембране кожи
Антитела к антигенам коры надпочечников, щитовидной железы, слизистой желудка
Антитела к эритроцитам, тромбоцитам, лейкоцитам, лекарственным средствам
| |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
©2015- 2024 pdnr.ru Все права принадлежат авторам размещенных материалов.
|