Растворы для проведения цветной реакции.

Раствор № 1. 0,5 г сульфаниловой кислоты растворяют в 150 мл раствора уксусной кислоты (2,0 моль/куб.дм).

Раствор № 2. 0,2 г альфа-нафтиламина кипятят с 20 мл воды, раствор фильтруют и прибавляют к фильтрату 180 мл раствора уксусной кислоты (2 моль/куб, дм). Раствор хранят в темной склянке.

Реактив Грисса:смешивают равные объемы растворов 1 и 2. В случае появления при смешивании растворов розовой окраски до­бавляют цинковую пыль, взбалтывают и фильтруют. Этот реактив Грисса готовят непосредственно перед анализом.

Стандартные растворы азотисто-кислого натрия.Для приго­товления основного раствора отвешивают навеску азотисто-кисло­го натрия, содержащую 1 г основного вещества.

Пример расчета.При использовании азотисто-кислого натрия ч.д.а. массу навески (Хч) в граммах вычисляют по формуле

Хч - 100 • 1/98 - 1 • 0204,

где 98 - количество основного вещества, содержащегося в 100 г ре­актива.

Навеску переносят в мерную колбу вместимостью 1000 мл и доводят дистиллированной водой до метки.

Для приготовления рабочего раствора 10 мл основного раствора переносят в мерную колбу емкостью 500 мл и доводят водой до метки.

Для приготовления образцового раствора 5 мл рабочего раство­ра переносят в мерную колбу емкостью 100 мл и доводят водой до метки. 1 мл образцового раствора содержит 0,001 мг (1мкг) азоти-сто-кислого натрия.

Построение градуировочного графика.В 6 мерных колб вмес­тимостью по 100 мл каждая пипеткой вносят рабочий раствор: 0, 1,0, 2,0, 4,0, 6,0, 8,0 мл. В первую колбу рабочий раствор не вносят, используя ее как контрольную. В каждую колбу добавляют 5 мл раствора аммиака (3,0 моль/дм³), 10 мл раствора соляной кислоты (0,1 моль/дм³), доводят водой до метки и перемешивают. В кони­ческие колбы вместимостью 100 мл пипеткой переносят по 15 мл приготовленных растворов, 15 мл реактива Грисса и после 15 мин выдержки при комнатной температуре измеряют интенсивность розовой окраски на спектрофотометре при длине волны 538 нм или фотоэлектроколориметре с зеленым светофильтром (№ 6) в кювете толщиной поглощающего свет слоя 2 см в отношении ра­створа сравнения.

Готовят три серии стандартных растворов, начиная каждый раз с приготовления основного раствора из новой навески азотисто-кис-лого натрия.

По полученным средним данным из трех стандартных раство­ров строят на миллиметровой бумаге размером 25x25 см градуи-ровочный график. На оси абсцисс откладывают массовую концент­рацию нитрита натрия (мкг/мл), а на оси ординат - соответствую­щие оптические плотности. Градуировочный график должен про­ходить через начало координат.

Проведение анализа.20 г пробы, подготовленной к анализу, взве­шивают с погрешностью не более 0,01 г и помещают в химический стакан. Заливают 35-40 мл дистиллированной воды, нагретой до 55,0±0,2° С и настаивают, периодически перемешивая, в течение 1 0 мин. Затем вытяжку фильтруют через ватный фильтр в мерную колбу вместимостью 200 мл. Навеску несколько раз промывают и переносят на фильтр, где его промывают водой. Затем раствор ох­лаждают и доводят водой до метки.

Для приготовления вытяжки из сырокопченых продуктов сви­нины, баранины, говядины и сырокопченых колбас навеску 20 г зали­вают 200 мл предварительно отмеренной и нагретой до 55,0 ± 2,0°С

-------------- 420-------------

дистиллированной воды и настаивают, периодически помешивая, в течение 30 мин. Затем вытяжку фильтруют через ватный фильтр, не перенося осадка на фильтр.

20 мл вытяжки помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, добавляют 10 мл раствора гидроокиси натрия (0,1 моль/дм) и 40 мл раствора сернокислого цинка (0,45%) для осаждения бел­ков. Смесь в колбе нагревают 7 мин на кипящей водяной бане, после чего охлаждают, доводят до метки водой, перемешивают и фильтруют через обеззоленный бумажный фильтр.

Параллельно проводят контрольный анализ на реактивы, поме­щая в мерную колбу вместимостью 100 мл, вместо 20 мл вытяжки, 20 мл дистиллированной воды.

В коническую колбу вместимостью 100 мл помещают 5 мл про­зрачного фильтрата, полученного после осаждения белков, 1 мл раствора аммиака (3,0 моль/дм³), 2 мл раствора соляной кислоты (ОД моль/дм³), 2 мл дистиллированной воды и для усиления ок­раски 5 мл образцового раствора азотисто-кислого натрия, содер­жащего 1 мкг/мл. Затем в колбу приливают 15 мл реактива Грисса и через 15 мин измеряют интенсивность окраски на спектрофото­метре при длине волны 538 нм или на фотоколориметре с зеле­ным светофильтром (№ 6) в кювете с толщиной поглощающего свет слоя 2 см в отношении раствора сравнения.

Обработка результатов.Массовую долю нитрита (Хз) в процен­тах вычисляют по формуле

Х₈ - (М, • 200 • 100 • 100 • 30) / m • 20 • 5 • 10^е, где Mj - массовая концентрация нитрита натрия, найденная по гра-дуировочному графику, мкг/мл;

m - масса навески продукта, г;

10^е - коэффициент перевода в г.

За окончательный результат испытания принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений и вычисляют с точностью до 0,0001%. Предел возможных значе­ний относительной погрешности измерений - 2% при вероятно­сти 0,95.

Расхождение между двумя параллельными определениями (т.е. выполненными одним аналитиком одновременно или непосред­ственно одно за другим) не должно превышать 0,0002%. Расхож­дение между результатами, полученными в двух разных лаборато­риях, не должно превышать 0,0004%.

Пример градуировочного графика для определения содержания нитрита натрия с помощью фотоэлектроколориметра марки ФЭК-56 с зеленым светофильтром № 6 на рис. 5.

-------------- 421-----------

Кювета 1 см

0,34 0,30 0,26 0,22 0,18 0,14 0,10 0,06 0,02

0,02 0,10 0,18 0,26 0,34

Мкг NaNQ, в 1 мл раствора

Рис.5

0,42 0,50

Глава 9

ВЕТЕРИНАРНО-САНИТАРНАЯ ПРОФИЛАКТИКА

ПИЩЕВЫХ ТОКСИКОИНФЕКЦИЙ

И ТОКСИКОЗОВ

етеринария призвана не только лечить больных животных, но и охранять здоровье людей и животных. У народов раз­ных стран мира до сих пор бытует старинная классификация бо­лезней людей, возникающих иногда вследствие употребления в пищу растительных и животных продуктов. Именуют их обычно по на­званию съеденных продуктов: например, если человек заболел пос­ле того, как съел недоброкачественное мясо, говорят, что это мясное отравление, рыбу - рыбное, колбасу - колбасное и т. п.

Хорошо известно, что мясо, рыба и другие продукты животного и растительного происхождения - источники основных питатель­ных веществ нашего рациона. Почему же иногда наступает отрав­ление или какое-нибудь алиментарное заболевание человека?

Медицинским и ветеринарным работникам важно было выяс­нить: что вызывает эти болезни? Чем объяснить неожиданное по­явление единичных, групповых и даже массовых отравлений?

В литературе, особенно прошлого столетия, описано много слу­чаев, когда медицинские и ветеринарные врачи устанавливали доб­рокачественность мяса, однако после его употребления человек тя­жело заболевал. Это вызывало тревогу как у населения, так и у работников ветеринарной и медицинской служб.

Долгое время ученые мира не могли разгадать этой загадки. Одно время полагали, что виной тому синильная кислота, которая образуется в мясе при определенных условиях, а затем соли меди, якобы появляющиеся при варке в плохо луженой посуде.

С открытием птомаинов, образуемых в гниющем мясе, стали искать причину в них. И лишь когда была установлена связь мяс­ных отравлений у людей с заболеваниями животных, решили более целенаправленно изучать их причины.

Вскоре в ряде городов появились описания мясных отравлений, возникавших у людей после употребления мяса животных, при жизни больных гнойными, септическими, послеродовыми заболева­ниями, маститами и др.

В конце прошлого столетия, в период развития медицинской и ветеринарной микробиологии, основными виновниками мясных отравлений стали считать возбудителей некоторых болезней жи­вотных, особенно паратифозных бактерий и так называемых небо­лезнетворных микробов, которые, развиваясь в мясе или других продуктах, накапливали там ядовитые вещества и при поступле­нии с пищей в организм человека вызывали тяжелые заболевания.

Изучая болезни, общие для человека и животных, в целях уточ­нения роли бактерий в возникновении мясных отравлений иссле­дователи взяли за основу классификации мясных отравлений бак­териальный принцип и объединили всех возбудителей мясных от­равлений в четыре группы. Среди них центральное место заняли возбудители ботулизма и паратифозные бактерии, остальные отно­сились к условно-патогенным и малоизученным микроорганизмам.

Хотя эта классификация не раскрывала сущности всех вопро­сов данной темы, тем не менее дала солидный толчок для последу­ющего изучения мясных отравлений. В частности, ученые разных стран мира своими исследованиями доказали, что не все мясные отравления обусловливаются микроорганизмами и их токсинами, а могут вызываться разнообразными ядовитыми химическими веще­ствами и продуктами растительного и животного происхождения.

Кроме того, возбудители мясных отравлений могут встречаться не только в мясе, но и в рыбе, молоке и др. продуктах.

В итоге в мировой литературе накопилось много сведений, ха­рактеризующих большое количество выявленных причин мясных, рыбных, молочных и других отравлений. Описан сложный меха­низм их действия и клинического проявления. Появились новые названия, термины и обоснования, порой противоречивые по своему содержанию, в которых трудно разобраться рядовому медицинско­му и ветеринарному работнику.

В результате многочисленных исследований, например, пищевое заболевание, возникшее после приема пищи, содержащей токсины, выработанные бактериями, решили именовать пищевым бактерио-токсикозом, если же токсическое вещество выработано грибами -пищевым микотоксикозом, растениями-фитотоксикозом, минераль­ными или синтетическими ядами - пищевым химическим токси­козом и т. п.

Такого рода направление в изучении данной проблемы позволи­ло все эти болезни объединить в одну группу под общим названи­ем пищевые заболеванияи дать им научно обоснованное опреде­ление: пищевые заболевания объединяют все алиментарные болез­ни человека с разной этиологией и клинической картиной, протека-

-------------- 424-------------

ющие в острой или хронической формах, но в возникновении кото­рых как фактор передачи обязательно должен участвовать продукт питания, содержащий в своем составе какое-то вредное начало бак­териального, вирусного, грибкового, паразитарного, химического или другого происхождения. При этом перечисленные болезни предло­жено именовать не по названию продукта, как это было раньше, а в зависимости от вызывающей их причины. По этому же принципу составлена нижеприводимая классификация.