Работа 4. Определение группы крови

Кровь каждого человека принадлежит к одной из 4-х групп. Кровь различных групп отличается содержанием агглютининов и агглютиногенов. Агглютинины, склеивающие вещества, находятся в плазме и представляют собой белки (антитела). Агглютиногены – вещества, способные склеиваться, содержатся в эритроцитах, как правило, это гликопротеиды (антигены). Имеются 2 вида агглютиногенов А и В и соответственно 2 вида агглютининов a и b. Реакция агглютинации (склеивания) наступает при смешении однотипных агглютининов и агглютиногенов. При переливании крови, прежде всего, следует учитывать свойства эритроцитов донора, т. к. они несут на себе гораздо большее количество антигенных детерминант, нежели белки плазмы. Последние вводятся в относительно небольшом количестве и, разводясь в крови реципиента, теряют свои агглютинирующие свойства. Однако при переливании значительного количества крови учитывают и агглютинины донора. В настоящее время общепринятой является система групп крови АВО.

Перед началом выполнения задания заполняем таблицу.

Определение группы крови производят в помещении с хорошим освещением при температуре 15–25 ^оС.

Цель работы. Определить групповую принадлежность представленной пробы крови.

Материалы и оборудование: стандартные изогемагглютинирующие сыворотки групп Oαβ (I), Aβ (II), Bα (III) и ABo (IV) или моноклональные реагенты анти-А, анти-В, анти-А+В; 0,9 % изотонический раствор NaCl; белые пластинки со смачиваемой поверхностью (рис. 2); пипетки, маркированные для каждой группы сыворотки; стеклянные или пластмассовые палочки для перемешивания капель крови и сыворотки каждой группы в отдельности; песочные часы на 5 мин или секундомер; штативы для стандартных сывороток или реагентов.

Рис. 2. Стекло с лунками

Ход работы. Предметное стекло с лунками помещаем на белую бумагу и наносим на него по 1 капле (0,1 мл) стандартных сывороток I, II и III группы. Получаем один ряд по три капли, как правило, в следующем порядке слева направо: Оαβ (анти-А+В), Aβ (анти-В) и Вα (анти-А).

В ходе клинических исследований рекомендуется наносить стандартные сыворотки соответствующих групп в 2-х повторах.

Рядом с каждой каплей сыворотки наносим маленькую, величиной с булавочную головку, каплю (0,01 мл) исследуемой крови, соблюдая соотношение сыворотка : кровь как 10 : 1. Смешиваем каждую каплю сыворотки с каплей крови индивидуальной чистой стеклянной палочкой. После перемешивания сыворотки и крови предметное стекло пока­чиваем вращательными движениями и оставляем в покое на 1–2 мин и снова периодически покачиваем. За ходом реак­ции наблюдаем 3–5 мин, хотя, как правило, агглю­тинация начинается уже по прошествии 5–10 с после начала смешивания. При наличии агглютинации капля становится прозрачной, а эритроциты склеиваются в виде комочков.

Пятиминутная инкубация смеси необходима потому, что эритроциты подгруппы A2 (II) могут давать позднюю агглютинацию.

По мере наступления агглютинации (через 5 мин) в кап­ли, в которых она наступила, вносим по капле (0,05 мл) физиологи­ческого раствора, и наблюдение продолжаем еще 2 мин.

Физиологический раствор предназначается для диффе­ренцировки истинной и псевдоагглютинации, которая пред­ставляет собой в основном скопления эритроцитов, сложив­шихся в монетные столбики. Добавление физиологического раствора не разрушает истинной агглютинации. В тех же случаях, когда образуются монетные столбики, скопление эритроцитов в течение 1–2 мин после добавления физиологического рас­твора распадается и капля становится равномерно окрашенной в красный цвет.

Результаты определения группы крови трактуюем на основании наличия или отсутствия агглютинации. При по­ложительной реакции в каплях появляются агглютинаты, состоящие из склеенных эритроцитов. Сыворотка при этом почти или совсем обесцвечивается. Отрицательная реакция не сопровождается образованием агглютинатов, и капли в течение всей реакции остаются равномерно окрашенными в красный цвет.

Результаты реакции в каплях сывороток одной группы для обоих повторов (в случае клинических исследований) должны совпадать.

Заполняем таблицу, обозначая знаком «+» наличие агглютинации, знаком «–» – ее отсутствие.

Результаты.

Вывод (сделайте вывод о групповой принадлежности исследуемой крови).

Реакция стандартных сывороток трех групп с исследу­емой кровью может дать четыре возможных варианта:

1. Кровь принадлежит к группе О (I): сыворотки всех трех групп дали отрицательную реакцию, т. е. исследуемые эритроциты не содержат антигенов А и В;

2. Кровь принадлежит к группе A (II): сыворотки групп Oαβ (I) и Вα (III) дали положительную реакцию, группы Аβ (II) – отрицательную реакцию, т.е. эритроциты содер­жат только антиген А;

3. Кровь принадлежит к группе В (III): сыворотки групп Oαβ (I) и Aβ (II) дали положительную, группы Bα (III) ­отрицательную реакцию, т. е. исследуемые эритроциты со­держат только антиген В;

4. Кровь принадлежит к группе АВ (IV): сыворотки всех трех групп дали положительную реакцию, т. е. исследуемые эритроциты содержат антигены А и В.

Делать окончательный вывод о принадлежности исследуемой крови к группе АВ (IV) можно толь­ко после ее дополнительного исследования стандартной сы­вороткой группы АВо (IV).

С этой целью в чистую лунку предметного стекла нанос­им большую каплю стандартной сыворотки группы АВо (IV) и в нее вносим исследуемую кровь в соответствующей пропорции (10 : 1). После перемешивания сыворотки и крови наблюдаем реакцию 5 мин, периодически покачивая предметное стекло вращательными движениями. Сыворотка группы АВо (IV) не содержит никаких анти­тел и не должна давать положительной реакции. Всякая положительная реакция с сывороткой АВо (IV) говорит о наличии неспецифической агглютинации. Исследуемая кровь может быть отнесена к группе АВ (IV) только при наличии положительной реакции в сы­воротках групп Oαβ (I), Aβ (II) и Вα (III) и отсутствии реакции с сывороткой группы АВо (IV). Отступление от этого правила, как показала практика, в конечном счете приводит к ошибкам.

В ходе клинических исследований, при наличии панагглютинации, т. е. агглютинации со всеми сыворотками и, соответственно, невозможностью определить групповую принадлежность по системе АВО, проба крови подлежит обязательному направлению для исследования специалистом-­изосерологом.

Занятие 2. ФОРМЕННЫЕ ЭЛЕМЕНТЫ КРОВИ. ГЕМОГЛОБИН. Буферные системы крови

Контрольные вопросы

1. Классификация и характеристика форменных элементов крови.

2. Лейкоцитарная формула.

3. Механизмы гемостаза.

4. Гемоглобин. Соединения гемоглобина с различными газами. Миоглобин.

5. Буферные системы крови.

Количество или объем крови у здорового человека находится в пределах 6–8 % массы тела (4–6 л). Это состояние носит название нормоволемиии. После избыточного приема воды объем крови может повышаться (гиперволемия), а при избыточном потоотделении – падать (гиповолемия). Поскольку кровь состоит из клеток и плазмы, общий объем крови также складывается из объема плазмы и объема клеточных элементов. Часть объема крови, приходящаяся на клеточную часть крови, получила название гематокрит. У здоровых мужчин гематокрит находится в пределах 44–48 %, а у женщин – 41–45 %. Благодаря наличию многочисленных механизмов регуляции объема крови и объема плазмы (волюморецепторные рефлексы, жажда, нервные и гуморальные механизмы изменения всасывания и выделения воды и солей, регуляция белкового состава крови, регуляция эритропоэза и др.) гематокрит является относительно жесткой гомеостатической константой. Его длительное и стойкое изменение возможно лишь в условиях высокогорья, когда приспособление к низкому парциальному давлению кислорода усиливает эритропоэз, и соответственно повышает долю объема крови, приходящуюся на клеточные элементы. Нормальные величины гематокрита и, соответственно, объема клеточных элементов называют нормоцитемией. Увеличение объема, занимаемого клетками крови, называют полицитемией, а уменьшение – олигоцитемией.