Опыт 1. Определение концентрации пировиноградной кислоты (ПВК) в моче.

Приборы. 1. Штатив с пробирками.

2. Набор пипеток.

3. Фотоколориметр.

4. Кюветы, 0,5 см.

Реактивы. 1. Дистиллированная вода.

2. Моча.

3. Гидроксид натрия, 10%-ный раствор.

4. 2,4-динитрофенилгидразин, раствор.

ПВК крови конденсируется с 2,4-динитрофинилгидразином с образованием гидразона, который в щелочной среде дает коричнево-красный цвет раствора. По интенсивности его окраски судят о содержании ПВК.

1. В три пробирки внесите реактивы согласно следующей таблице:

2. Содержимое пробирок на 15 мин поместите в темное место при комнатной температуре.

3. В каждую пробирку внесите по 1 мл 10%-го раствора NаOH и через пять минут измерьте оптическую плотность при длине волны 620 нм опытной пробы против контрольной (О) и калибровочной пробы против контрольной (К).

4. Расчет проведите и по готовому калибровочному графику.

Расчетсодержания ПВК в суточной моче (на диурез 1500 мл):

= мг/сутки

Для пересчета содержания ПВК (в мг) в единицы количества вещества (мкмоль) надо умножить соответствующие величины на 11,4 (коэффициент пересчета).

Норма для человека:10-25 мг/сутки или 114-284 мкмоль/сутки пировиноградной кислоты.

Сравните полученные значения с нормальными величинами. Каковы причины повышенного содержания пировиноградной кислоты в сыворотке крови и моче?

Опыт 2. Определение активности сукцинатдегидрогеназы мышц.

Приборы. 1. Штатив с пробирками.

2. Набор пипеток.

3. Ступка с пестиком.

4. Водяная баня.

Реактивы. 1. Мышечная ткань курицы или кролика.

2. Янтарная кислота, 5%-ный раствор.

3. Метиленовая синь, 0,01%-ный раствор.

4. Растительное масло.

5. Стеклянный песок.

1. Взвесьте 10 г мышечной ткани и разотрите в ступке со стеклянным песком.

2. Полученный гомогенат промойте несколько раз на марле физраствором, для удаления растворимых веществ.

3. Полученную смесь разлейте по 5 мл в три пронумерованные пробирки.

4. Первую пробирку погрузите на 5 минут в кипящую водяную баню, после чего охладите ее до комнатной температуры.

5. В пробирку №1 и №2 добавьте 3 мл 5%-ной янтарной кислоты и 3 капли раствора метиленового синего (до появления голубого окрашивания).

6. В пробирку №3 добавьте 0,5 мл дистиллированной воды и 3 капли раствора метиленового синего (до появления голубого окрашивания).

7. Затем во все пробирки налейте немного масла для изоляции смеси от кислорода воздуха.

8. Все пробирки инкубируйте в водяной бане (40^оС) в течение 10 минут.

Дайте объяснение наблюдаемым явлениям. Какова функция метиленовой сини в данном эксперименте? На какое соединение эта функция возлагается в живой клетке?

Дата выполнения ________ Балл ____ Подпись преподавателя ____________

Занятие № 13. «Обмен углеводов (часть 1)»

Цель занятия: рассмотреть факторы, влияющие на переваривание углеводов; освоить метод количественного определения глюкозы в крови.

ВОПРОСЫ К КОНТРОЛЬНОЙ РАБОТЕ:

1. Основные углеводы пищи, их характеристика. Биологическая роль и функции углеводов в организме.

2. Переваривание угле­водов в желудочно-кишечном тракте у моногастричных животных. Ферменты, участвующие в переваривании углеводов. Нарушения переваривания углеводов.

3. Особенности переваривания углеводов у жвачных животных. Пути включения летучих жирных кислот (ЛЖК) в метаболизм.

4. Метаболизм глюкозо-6-фосфата.

5. Регуляция содержания глюкозы в крови. Биологическая значимость данного явления.

6. Синтез и распад гликогена: последовательность стадий и биологическое значение этих процессов.

Дата выполнения ________ Балл ____ Подпись преподавателя ____________

Экспериментальная работа.

Опыт 1. Влияние формальдегида на активность амилазы.

Приборы. 1. Штатив с пробирками.

2. Набор пипеток.

3. Водяная баня.

Реактивы. 1. Крахмал, 1%-ный раствор.

2. Амилаза, раствор.

3. Йод, 1%-ный раствор.

4. Формальдегид, 5%-ный раствор.

1. Возьмите две пробирки.