Испытания на количественное определение

Область применения. Эти требования не рассчитаны на охват всех возможных примесей. В частности, из того, что примесь не определяется с помощью описанных испытаний, не следует делать вывод, что она допустима, если здравый смысл и надлежащая фармацевтическая практика не допускают ее присутствия. См. также ниже раздел "Примеси".

Расчеты. Если при проведении вычислений требуется пересчет на сухое вещество или безводное вещество или оговорено какое-либо другое условие, то потерю в массе при высушивании, содержание воды или иной показатель определяют с помощью метода, описанного в монографии.

Пределы. Указываемые пределы основываются на результатах, полученных в рамках обычной аналитической практики; в них уже учтены обычные аналитические погрешности, допустимый разброс при производстве и приготовлении, а также ухудшение качества в процессе хранения в пределах, которые считаются приемлемыми. При определении соответствия продукта требованиям монографии к указанным пределам не должны добавляться никакие дополнительные допуски.

Результат, полученный в испытании, округляют до указанного в пределе количества значащих цифр (если нет других указаний). При этом последнюю цифру увеличивают на единицу, если цифра, отбрасываемая при округлении, больше или равна пяти. Если цифра, отбрасываемая при округлении, меньше пяти, последнюю цифру оставляют неизменной.

Указание и допустимый предел примесей. Примерное допустимое содержание примеси или суммы примесей может быть указано в скобках только для информации. Если для данной примеси не указано использование стандартного образца, ее содержание может быть выражено исходя из номинальной концентрации вещества, используемого для приготовления указанного в монографии раствора сравнения (если нет других указаний).

Лекарственные средства растительного происхождения. Для лекарственного средства растительного происхождения сульфатная зола, общая зола, растворимые в воде посторонние вещества, растворимые в спирте посторонние вещества, содержание воды, содержание эфирных масел и содержание действующих веществ вычисляют в расчете на лекарственное средство, которое не было специально высушено (если нет других указаний в монографии).

Эквиваленты. В тех случаях, когда приводится эквивалент, он дается с таким количеством значащих цифр, которое требуется в данной монографии.

Хранение. Информация и рекомендации, приводимые в разделе "Хранение", не являются исчерпывающими фармакопейными требованиями, и компетентные уполномоченные органы могут указывать конкретные условия хранения, обязательные для исполнения.

Описанные в Фармакопее продукты следует хранить таким образом, чтобы предотвратить их загрязнение и, по возможности, разложение. Если рекомендуются особые условия хранения, включая тип контейнера (см. выше раздел "Контейнеры") и температурные пределы, эти рекомендации приводятся в монографии.

Ниже разъясняются выражения, используемые в монографиях в разделе "Хранение".

«Защищать от влаги». Продукт должен храниться в воздухонепроницаемом контейнере. При вскрытии контейнера во влажной атмосфере необходимо проявлять осторожность. При необходимости низкое содержание влаги можно поддерживать с помощью осушающих веществ, при условии, что их прямой контакт с продуктом будет исключен.

«Защищать от света». Одно из трех требований:

- контейнер должен быть изготовлен из материала, в достаточной степени поглощающего свет, способный вызвать фотохимические превращения;

- контейнер должен быть помещен во внешний контейнер, обеспечивающий такую защиту;

- лекарственное вещество должно храниться в темном месте, исключающем возможность попадания такого света.

Маркировка. Маркировка является предметом национальных и наднациональных законодательств, а также международных соглашений. Таким образом, информация в подразделе "Маркировка" не претендует на полноту. Она ориентирована, прежде всего, на фармакопейные цели, и обязательными являются только те положения, которые необходимы для подтверждения соответствия продукта статье. Вся остальная информация носит рекомендательный характер. В тех случаях, когда в Фармакопее употребляется термин "этикетка", соответствующая информация может быть помещена на контейнере, на упаковке или во вкладыше, в зависимости от решения компетентного уполномоченного органа.

Предостережения. Описываемые в статьях Фармакопеи продукты и реактивы могут оказаться опасными для здоровья, если не предпринять необходимые меры. Во всех случаях следует придерживаться принципов надлежащей лабораторной практики (НЛП, GLP), а также соблюдать соответствующие положения техники безопасности. В некоторые статьи включены специальные указания о необходимых мерах предосторожности. Но отсутствие таких указаний не следует трактовать как отсутствие всякого риска.

Примеси. В монографии может быть приведен перечень всех известных и потенциальных примесей, для которых показано, что они контролируются испытаниями. Этот перечень может быть подразделен на две части: "Конкретно указываемые примеси" и "Другие обнаруживаемые примеси". В первую часть включают примеси, которые ранее уже были квалифицированы компетентным уполномоченным органом. В этот список также включают примеси, для которых известно, что они могут образовываться в результате естественного метаболизма. Во вторую часть списка включают потенциальные примеси, которые не были обнаружены ни в одном из образцов субстанции за время разработки монографии или содержание которых не превышало 0.1%. Но эти примеси в принципе детектируются с помощью приведенных испытаний.

Физические характеристики. В монографии может также приводится в качестве информации и рекомендаций перечень физических характеристик, которые не относятся к официальным требованиям, но, тем не менее, важны при использовании продукта (см. выше «Общие положения»).

Стандартные образцы, стандартные препараты и эталонные спектры. Некоторые монографии предусматривают использование стандартных образцов, стандартных препаратов или эталонных спектров. Они разработаны с учетом их предназначения, и их следует использовать так, как предписывает Фармакопея. В других обстоятельствах они могут оказаться непригодными.

Стандартные образцы, стандартные препараты и эталонные спектры вводятся в действие уполномоченным фармакопейным органом. Полный перечень может быть получен в указанной организации. Эти стандартные материалы являются официальными в случае арбитража.

Рабочие стандартные образцы могут использоваться для проведения текущих анализов при условии, что они откалиброваны по Фармакопейным стандартным образцам (ФСО).

Вся информация, необходимая для правильного использования стандартного образца или стандартного препарата, приводится на упаковке, во вкладыше или в сопроводительной документации. Если не указано никаких условий высушивания, стандарт следует использовать в таком виде, в котором он получен. Ни сертификат анализа, ни какая-либо иная дополнительная информация не предоставляется. Не указывается также дата "Годен до ...": гарантируется стабильность препарата в момент отправки и возможность его использования в течение шести месяцев при условии, что не раскупоренный контейнер хранится в условиях, указанных в сопроводительной документации. По истечении этого срока следует проконсультироваться в уполномоченном фармакопейном органе. Стабильность содержимого вскрытого контейнера не гарантируется.

Общие положения

Все общие статьи на методы анализа, лекарственные формы и фармако-технологические испытания (далее просто общие статьи), а так же частные статьи на лекарственные субстанции, входящие в ГФУ, делятся на две категории: гармонизованные с ЕФ и национальные.

Все общие и частные статьи ГФУ, гармонизованные с ЕФ, построены в следующем формате.

Название. Национальная часть: дополнительные испытания, информационные и иные материалы.

В некоторых случаях национальная часть может отсутствовать. В том случае, когда производство лекарственного средства не проводится в соответствии с требованиями надлежащей производственной практики (НПП, ОМР), установленными в Европейском Сообществе, к данному лекарственному средству предъявляются альтернативные требования, указанные в национальной части статьи, о чем дается указание сразу после черты.

Нумерация общих статей ГФУ, где она имеется, совпадает с нумерацией соответствующих общих статей ЕФ. Общие статьи, не описанные в ЕФ, вынесены в конец соответствующего раздела. Общие статьи на субстанции и лекарственные формы расположены в алфавитном порядке.

Другие положения, распространяющие на общие и частные статьи

Температура. Помимо терминов, приведенных выше, используются также следующие термины:

- теплый - от 40°С до 50°С

- горячий - от 80°С до 90°С

- температура «водяной бани» - от 98°С до 100°С

- температура «ледяной бани» - 0°С

Способы выражения концентрации. Если указано, что при приготовлении смеси растворителей их берут в соотношении (а:b), то имеется в виду соотношение объемов. Например, соотношение: гексан-бензол (1:3) означает, что смешивают 1 объем гексана с 3 объемами бензола.

Монографии

Производство. Описанные в Фармакопее продукты могут производиться в соответствии с требованиями, принятыми в Украине.

Свойства. В том случае, когда на продукт, описанный в монографии, нет Сертификата соответствия ЕФ или ГФУ, информация, приведенная в этом разделе, если нет других указаний, представляет собой требования, за исключением информации, приведенной в скобках.

Растворимость. Для определения растворимости навеску субстанции вносят в отмеренное количество растворителя и непрерывно встряхивают в течение 10 мин при 20±2°С. Предварительно образец может быть растерт. Для медленно растворимых образцов, требующих для своего растворения более 10 мин, допускается также нагревание на водяной бане до 30°С; наблюдение производят после охлаждения раствора до 20±2°С и энергичного встряхивания в течение 1-2 мин.

Если указано, что субстанция растворима в жирных маслах, то имеется в виду, что она растворима в любом масле, относящемся к классу жирных масел.

Если в испытаниях с использованием хроматографических методов после указания вводимого или наносимого объема раствора в микролитрах в скобках указывается количество вещества в микрограммах, то имеется в виду приблизительное количество.

Испытание и количественное определение. Если в испытаниях с использованием хроматографических методов после указания вводимого или наносимого объема раствора в микролитрах в скобках указывается количество вещества в микрограммах, то имеется в виду приблизительное количество.

Если указано, что испытание проводят "в защищенном от света месте", то это означает, что следует принять меры для избегания попадания прямого солнечного света, любого другого яркого света, а также исключить попадание ультрафиолетового света, например, путем использования посуды из специального стекла, работы в затемненной комнате и т.д.

Стандартные образцы, стандартные препараты и эталонные спектры. Фармакопейные стандартные образцы (ФСО) - стандартные образцы, введенные Европейской Фармакопеей или Фармакопеей Украины.

ИДЕНТИФИКАЦИЯ

Идентификация - подтверждение идентичности анализируемого индивидуального лекарственного вещества, так и лекарственного вещества входящего в состав лекарственной формы, осуществляемое на основе требований аналитически нормативной документации (ГФУ, ФС). Испытания проводят физическими, химическими и физико-химическими методами. Непременным условием идентификации является подтверждение наличия тех или иных ионов, функциональных групп, входящих в молекулу лекарственного вещества.

Так, с помощью физических методов ГФУ рекомендует изучать физические свойства и константы лекарственных веществ. Подлинность лекарственного вещества подтверждает: агрегатное состояние, окраска, запах, форма кристаллов, летучесть и другие свойства. Более объективным в идентификации является установление ряда физических характеристик лекарственного вещества, то есть растворимости, температуры плавления, температуры затвердевания, кипения, плотности, вязкости и других.

Химические методы установления подлинности в зависимости от подходов к идентификации можно разделить на следующие группы:

- идентификация неорганических лекарственных веществ;

- идентификация органических лекарственных веществ;

- идентификация элементорганических лекарственных веществ.

Идентификация неорганических лекарственных веществ основана на обнаружении с помощью химических реакций катионов, анионов входящих в состав молекулы.

В основу идентификации органических лекарственных веществ положены химические реакции, подтверждающие наличие тех или иных функциональных групп. Для этих целей используются общие (групповые) химические реакции, реакции образования солей и комплексных соединений и другие.

Ряд химических реакций, используемые для идентификации неорганических и органических лекарственных веществ, применяют для испытания подлинности элементорганических соединений. Так, ГФУ предполагает в ряде случаев определение других элементов (сера, фосфор, галогены, висмут, ртуть, мышьяка и другие), входящих в состав лекарственных веществ. Исходя из того, что атомы этих элементов в молекуле находятся не в виде ионов, необходимым условием идентификации является перевод ковалентно связанного атома в ионногенное или молекулярное состояние. Для этих целей применяют озоление (сжигание, прокаливание, пиролиз), минерализация в присутствии окислителей, минерализация в присутствии восстановителей и другие.

На сегодня ГФУ значительное место уделяет современным подходам к идентификации лекарственных препаратов, которые основаны на использовании физико-химических методов. Физико-химические методы обладают высокой чувствительностью, избирательностью, экспрессивностью и воспроизводимостью. Важная особенность этих методов является высокая объективность, валидность и надежность.

ГФУ для идентификации большинства лекарственных препаратов органической природы использует спектрофотометрию в ультрафиолетовой и инфракрасной части спектра, рефрактометрию, поляриметрию, хроматография и другие. Как отмечалось уже в первой главе пособия, ГФУ рекомендует использовать "первую" и "вторую" идентификацию, обычно использует первую идентификацию в основу которой положены в большинстве случаев физико-химические методы.

ИДЕНТИФИКАЦИЯ КАТИОНОВ

Алюминий

К раствору испытуемой субстанции прибавляют кислоту хлористоводородную разведенную для образования алюминия хлорида. Затем прибавляют реактив тиоацетамида:

Осадок при этом не образуется, так как тиоацетамид образует с Al³⁺ растворимый комплекс в отличие от нерастворимых комплексов – с Bi³⁺, Pb²⁺, Sn²⁺, Hg²⁺ и др.

К полученному раствору прибавляют по каплям (!) раствор натрия гидроксида разведенного до образования гелеобразного осадка:

Al³⁺ + 3OH‾ → Al(OH₃)↓.

Последующее прибавление раствора натрия гидроксида разведенного приводит к растворению осадка с образованием комплексной соли – тринатрия гексагидроксоалюмината, разлагающейся с выделением воды до мета-алюмината:

Al(OH)₃ + 3NaOH → Na₃[Al(OH)₆];

Na₃[Al(OH)₆] → NaAlO₂ + 2H₂O + 2NaOH.

Постепенно прибавляют раствор аммония хлорида. Вновь образуется гелеобразный белый осадок:

NaAlO₂ + H₂O + NH₄Cl → Al(OH)₃↓ + NH₃ + NaCl.

Методика: около 15 мг испытуемой субстанции растворяют в 2 мл воды Р. К полученному раствору или к 2 мл раствора, указанного в частной статье, прибавляют 0,5 мл кислоты хлористоводородной разведенной Р и около 0,5 мл реактива тиоацетамида Р, осадок не образуется. Затем прибавляют по каплям раствор натрия гидроксида разведенный Р; образуется гелеобразный белый осадок, растворяющийся при последующем прибавлении раствора натрия гидроксида разведенного Р. К полученному раствору постепенно прибавляют раствор аммония хлорида Р, вновь образуется гелеобразный белый осадок.

Кроме приведенного в ГФ Украины метода идентификации алюминия возможны и другие:

Реакция с ализарином.

Ализарин с ионами алюминия образует комплексное соединение красного цвета AlOH[C₁₄H₆O₃(OH)]₂, которое не растворяется в кислоте уксусной. Оно называется "алюминиевым лаком".

Ионы железа (III), висмута, меди (II) и некоторые другие мешают реакции, поскольку образуют аналогичные окрашенные комплексы:

Fe³⁺ + 3OH‾ → Fe(OH)₃↓;

2Cu²⁺ + 2OH‾ → Cu(OH)₂↓;

Bi³⁺ + OH‾ → [BiO]⁺ +H⁺.

Алюминий определяют данной реакцией в слабокислом растворе (при рН = 4,2-4,6). В таких условиях ализарин имеет желтый цвет. В щелочной среде реактив имеет фиолетовый цвет и поэтому влияет на результаты обнаружения алюминия, маскируя его красное окрашивание:

Методика: к 3-5 каплям исследуемого раствора прибавляют 2 М раствор натрия гидроксида до сильно щелочной реакции. Если выпадает осадок, его отделяют центрифугированием. К прозрачному раствору прибавляют 2-4 капли 0,2% раствора ализарина (появляется фиолетовое окрашивание) и отдельными каплями 2 М раствор кислоты уксусной (до исчезновения фиолетового окрашивания).

В присутствии алюминия, в зависимости от его концентрации, выпадает красный осадок или раствор окрашивается в красный цвет.

Реакция с натрия тиосульфатом.

При кипячении с растворами солей алюминия натрия тиосульфат образует осадок алюминия гидроокиси и выделяет свободную серу:

2Al³⁺ + 3S₂O₃^2‾ + 3H₂O → 2Al(OH)₃↓ + 3S↓ + 3SO₂↑,

или

Al₂(SO₄)₃ + 3Na₂S₂O₃ + 3H₂O → 2Al(OH)₃↓ + 3Na₂SO₄ + 3S↓ + 3SO₂↑.

Аммония соли

А) Соли аммония обнаруживают реакцией с раствором натрия кобальтинитрита. Предварительно, для вытеснения аммония из его солей, к испытуемому раствору прибавляют магния оксид:

2NH₄⁺ + MgO → Mg²⁺ + 2NH₃ + H₂O.

Через жидкость пропускают ток воздуха и выходящий газ (NH₃) направляют в 0,1М раствор кислоты хлористоводородной с индикатором метиловым красным. Окраска индикатора переходит в желтую:

NH₃ + HCl → NH₄Cl;

При добавлении реактива выпадает осадок желтого цвета:

NH₄⁺ + Na₃[Co(NO₂)₆] → (NH₄)₂Na[Co(NO₂)₆]↓.

Необходимо учитывать, что реакцию нельзя проводить в щелочной среде, так как происходит разложение реактива с образованием темно-бурого осадка Со(ОН)₃:

[Co(NO₂)₆]³‾ + 3OH‾ → Co(OH)₃↓ + 6NO₂‾.

В присутствии сильных кислот комплексный ион также разлагается:

[Co(NO₂)₆]³‾ + 6H⁺ → Co³⁺ + 6НNO₂.

Для проведения реакции важно использовать свежеприготовленный раствор натрия кобальтинитрита, так как при стоянии он разлагается, причем бурое окрашивание его изменяется на малиновое (цвет ионов Со²⁺) и такой реактив непригоден для проведения реакции.

Методика: к испытуемому раствору, указанному в частной статье, прибавляют 0,2 г магния оксида Р. Через жидкость пропускают ток воздуха и выходящий газ направляют в смесь 1 мл 0,1 М раствора кислоты хлористоводородной и 0,05 мл раствора метилового красного Р, окраска индикатора переходит в желтую. Затем прибавляют 1 мл свежеприготовленного раствора 100 г/л натрия кобальтинитрита Р; образуется желтый осадок.

Кроме приведенного в ГФ Украины метода идентификации солей аммония используется реакция осаждения реактивом Несслера.

Эта реакция применяется для открытия малых количеств аммиака или ионов аммония.

Она основана на взаимодействии щелочного раствора комплексной соли калия тетрайодмеркурата (K₂[HgI₄]) с аммиаком или солями аммония:

NH₄⁺ + 2[HgI₄]^2‾ + 2OH‾ → [NH₂Hg₂I₂]I↓ + 5I‾ + 2H₂O.

Методика: к 3-5 каплям исследуемого раствора прибавляют 0,5 мл 2 М раствора натрия гидроксида, смесь нагревают до кипения и центрифугируют. К центрифугату прибавляют 3-5 капель раствора калия тетрайодмеркурата щелочного. В присутствии аммония выпадает красно-коричневый осадок или раствор окрашивается в желто-бурый цвет.